口腔/咽拭子基因組 DNA 快速試劑盒
Rapid Swab DNA Kit
產(chǎn)品信息：
保存條件：本試劑盒在室溫儲存 12 個月不影響使用效果. 蛋白酶 K 可室溫運(yùn)輸，建議
-20℃長期保存。
產(chǎn)品介紹：
本試劑盒采用特制的進(jìn)口 DNA 吸附柱和*的緩沖液系統(tǒng)，特別適合于從口腔
咽拭子中分離純化基因組 DNA。各種來源樣品裂解消化處理后 DNA 在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜（特別配備了 Carrier RNA 可以從體系中輕松捕獲微量核酸），再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟，將鹽、細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除，后低鹽的洗脫緩沖液將純凈的基因組DNA 從硅基質(zhì)膜上洗脫。純化后的 DNA 無雜質(zhì)和 PCR 抑制劑，可直接適用于 PCR 分析。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
- 配備了 Carrier RNA 用于充分收集特別微量DNA。
- 提取的 DNA 純度高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠，可適用于各種常規(guī)操作，包括 PCR、酶切、測序、Southern 雜交等。
- 注意事項(xiàng)：
1. 結(jié)合液 CB 或者抑制物去除液 IR 低溫時可能出現(xiàn)析出和沉淀，可以在 37℃水浴幾分鐘幫助重新溶解，恢復(fù)澄清透明后冷卻到室溫即可使用。
2. 避免試劑長時間暴露于空氣中發(fā)生揮發(fā)、氧化、pH 值變化。
3. Carrier RNA
1） Carrier RNA 使用方法：如果起始處理量很少（口腔咽拭子上收集到的細(xì)胞很少），我們推薦使用 Carrier RNA，如果預(yù)期有較大量 DNA 產(chǎn)量，用戶可以根據(jù)需要選擇是否加入 Carrier RNA。使用時每個樣品提取所需結(jié)合液 CB 中加入 1μl Carrier RNA 儲存溶液， 將結(jié)合液 CB 與 Carrier RNA 溶液充分顛倒混勻即可(結(jié)合液 CB 容易起泡沫,請勿使用渦旋振蕩混勻)。也可根據(jù)樣品數(shù)量，在總共需要的結(jié)合液CB 中加入總共需要的 Carrier RNA 混勻備用。混合液在室溫 24 小時內(nèi)穩(wěn)定。
- Carrier RNA 加入過多造成 DNA 洗脫液中 Carrier RNA 濃度過高，下游 PCR 反應(yīng)可能受干擾，加入過少可能并不能幫助提高 DNA 產(chǎn)量和 PCR 敏感度，因此加入量應(yīng)該在具體試驗(yàn)中調(diào)整以得到*效果。
自備試劑：無水乙醇操作步驟：
提示：第--次使用前請先在 15ml 漂洗液 WB 中加入 60ml 無水乙醇，充分混勻，
加入后請及時在方框打鉤標(biāo)記已加入乙醇，以免多次加入!
取樣：取一根醫(yī)用消毒棉簽（手不要碰觸脫脂棉部位），伸進(jìn)口腔，緊靠臉頰內(nèi)側(cè)來回刮拭 20 次（不時旋轉(zhuǎn)棉棒），需充分接觸口腔粘膜。
注意事項(xiàng)：避免用手觸及棉簽，采集前可先用清水輕輕漱口。為防止樣本被食物或者飲料污染，取樣前 30 min 內(nèi)應(yīng)該避免進(jìn)食或者飲水。
1. 用剪刀將棉簽部分從其桿上剪下，放入 2ml 離心管中，加入 400μl 裂解液 ML。
2. 再加入 20μl 的蛋白酶 K (20mg/ml)溶液，立刻渦旋振蕩充分混勻，56℃放置 30 min， 期間每 10 min 渦旋混勻 10 sec。
3. 加入 400μl 結(jié)合液 CB，立刻渦旋振蕩充分混勻，70℃放置 10 min（擠壓去除拭子， 將盡可能多的裂解液轉(zhuǎn)移至新的離心管中）。
如果拭子上細(xì)胞數(shù)量少，導(dǎo)致提取的基因組 DNA 產(chǎn)量過低, 可以在 400μl 結(jié)合液 CB中加入 1μl Carrier RNA 儲存溶液。
4. 冷卻后加 200μl 無水乙醇，立刻渦旋振蕩充分混勻。簡短離心以除去管蓋內(nèi)壁的液滴，收集所有的液體到管底。（如果周圍環(huán)境高于 25℃,乙醇需要冰上預(yù)冷后再加入）
5. 將上一步混合物中加入一個吸附柱 AC 中（吸附柱放入收集管中），12,000rpm 離心
30-60 sec，倒掉收集管中的廢液。
6. 加入 500μl 抑制物去除液 IR，12,000rpm 離心 30 sec，棄廢液。
7. 加入 500μl 漂洗液 WB（請先檢查是否已加入無水乙醇!），12,000rpm 離心 30 sec，棄掉廢液。
8. 重復(fù)操作步驟 7。
9. 將吸附柱 AC 放回空收集管中，12,000rpm 離心 2 min，將吸附柱置于室溫放置數(shù)分鐘，以*晾干吸附材料中殘余的漂洗液, 以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。
10. 取出吸附柱AC，放入一個干凈的離心管中，在吸附膜的中間部位加 20-50μl 洗脫緩沖液 EB （洗脫緩沖液事先在 65-70℃水浴中預(yù)熱效果更好）， 室溫放置 1 min，12,000rpm 離心 1 min。將得到的溶液重新加入離心吸附柱中，室溫放置 1 min，12,000rpm 離心 1 min。洗脫體積越大，洗脫效率越高，如果需要DNA 濃度較高，可以適當(dāng)減少洗脫體積， 但是小體積不應(yīng)少于 20μl，體積過小降低 DNA 洗脫效率，減少 DNA 產(chǎn)量。（注意:DNA 產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃，以防 DNA 降解）
DNA 濃度及純度檢測
得到的基因組DNA---片段的大小與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有關(guān)。回收 得到的DNA---片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測濃度與純度。
DNA 應(yīng)在 OD260 處有顯著吸收峰，OD260 值為 1 相當(dāng)于大約 50μg/ml 雙鏈 DNA、
40μg/ml 單鏈 DNA。OD260/OD280 比值應(yīng)為 1.7-1.9，如果洗脫時不使用洗脫緩沖液，而使用滅菌水比值會偏低，因?yàn)?pH 值和離子存在會影響光吸收值，但并不表示純度低。
本產(chǎn)品僅供科研不用于臨床診斷
實(shí)驗(yàn)室代做實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目
