微量法

測定意義

*磷是土壤中可被植物吸收的磷組分，包括全部水溶性磷、部分吸附態磷及有機態磷，土壤中*磷是限制植物生長主要因子之一。

測定原理

用弱堿性提取堿溶性磷和吸附態磷，用鉬銻抗比色法測定。

自備實驗用品及儀器

天平、常溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板、震蕩儀。

試劑組成和配制

提取液：液體 105mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：粉劑×1 支，4℃避光保存。臨用前加 0.5mL 蒸餾水溶解。試劑二：液體 1mL×1 支，4℃保存。

工作液：臨用前將試劑一和試劑充分混勻，加 48.5mL 蒸餾水混勻。

樣本處理

新鮮土樣風干，過20目篩，按照土壤質量（g）：提取液體積(mL)為1：20的比例（建議稱取約0.05g土樣，加入1mL提取液），振蕩提取1h，10000g ，25℃離心10min，取上清液待測。

測定操作表

	空白管	測定管
樣本（μL）		20
提取液（μL）	60	40
工作液（μL）	80	80
H2O（μL）	60	60
充分混勻，25℃靜置 30min
于微量石英比色皿/96 孔板中，蒸餾水調零，測定 700nm 處吸光值 A，分別記為 A 空白管和 A 測定管，△A=A 測定管-A 空白管

計算公式

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下標準曲線：y=0.237x-0.2018，R2=0.9992

*磷含量（mg/kg）=（△A+0.2018）÷ 0.237×V 反總÷（W×V 樣÷V 樣總）

= 42.19×（△A+0.2018）÷W

V 反總：反應總體積，0.2mL；V 樣：反應體系中加入樣本體積，0.02mL；V 樣總：加入提取液體積，1mL，W：樣本質量，g

b. 用 96 孔板測定的計算公式如下

標準曲線：y=0.1185x-0.2018，R2=0.9992

*磷含量（mg/kg）=（△A+0.2018）÷ 0.1185×V 反總÷（W×V 樣÷V 樣總）

= 84.38×（△A+0.2018）÷W

V 反總：反應總體積，0.2mL；V 樣：反應體系中加入樣本體積，0.02mL；V 樣總：加入提取液體積，1mL，W：樣本質量，g

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