人胎盤cDNA說(shuō)明書
Human Placenta cDNA
人胎盤 cDNA
Cat. No. YJ0568
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組分說(shuō)明
Cat. No. YJ0568
Volume 100 μl (20 reaction)
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
本產(chǎn)品是以人胎盤組織 RNA 為模板，oligodt 以及 Random 為引物, 用上海研謹(jǐn)生物的高靈敏度的逆轉(zhuǎn)錄酶(YJ0740)
反轉(zhuǎn)錄得到的 PCR 即用型 cDNA，可用于 PCR 實(shí)驗(yàn)的陽(yáng)性對(duì)照。
純度
OD260/280≈1.8
操作步驟
以下舉例為常規(guī) PCR 反應(yīng)體系和反應(yīng)條件，實(shí)際操作中應(yīng)根據(jù)模板、引物結(jié)構(gòu)和目的片段大小丌同進(jìn)行相應(yīng)的改進(jìn)
和優(yōu)化。
1. PCR反應(yīng)體系：
試劑 50 μl體系 終濃度
10×Taq PCR Buffer with Mg 2+ 5 μl 1×
dNTP Mix，2.5 mM each 4 μl 200 μM each
Forward Primer，10 μM 2μl 0.4 μM
Reverse Primer，10 μM 2 μl 0.4 μM
Human Placenta cDNA 5 μl
Taq DNA Polymerase，2.5 U/μl 0.5 μl
RNase-Free Water up to 50 μl
注意：1）引物濃度請(qǐng)以終濃度0.1-1.0 μM作為設(shè)定范圍的參考。擴(kuò)增效率丌高的情況下，可提高引物的濃度；發(fā)生非特異性反應(yīng)時(shí)，可降 低引物濃度，由此優(yōu)化反應(yīng)體系。
2）鎂離子濃度請(qǐng)以終濃度1.5-3 mM作為設(shè)定范圍的參考。本產(chǎn)品的10×PCR Buffer中已經(jīng)含有15 mM鎂離子，可根據(jù)丌同的引物對(duì)和模板來(lái)調(diào)節(jié)鎂離子濃度，由此優(yōu)化反應(yīng)體系。
2. 將混合好的液體進(jìn)行PCR反應(yīng)。
3. 結(jié)果檢測(cè)：反應(yīng)結(jié)束后取5 μl反應(yīng)產(chǎn)物，加入適量上樣緩沖液后進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。
